双缩脲试剂要现配先用,而且分AB液,就是因为怕生成沉淀。
而在反应时,先加入NaOH提供碱性环境,再加入硫酸铜,由于蛋白质的存在,他们会和蛋白质反应生成紫色络合物,这个反应优先,所以不会有沉淀。
双缩脲试剂
双缩脲试剂本是用来检测双缩脲,由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应。当底物中含有肽键时,试液中的铜与多肽配位,络合物呈紫色。可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/mL。
双缩脲试剂中真正起作用的是硫酸铜,而氢氧化钾仅仅是为了提供碱性环境,因此它可被其他碱,如氢氧化钠所代替。向试剂中加入碘化钾,会延长试剂的使用寿命。酒石酸钾钠的作用是保护反应生成的络离子不被析出变为沉淀,从而使试剂失效。
中文名双缩脲试剂
外文名biuret reagent
外观透明蓝色水溶液
主要成分氢氧化钠
组成由双缩脲试剂A(NaOH)和双缩脲试剂B(CuSO4)两种试剂组成
制备01 g/mL的氢氧化钠水溶液和001 g/mL的硫酸铜水溶液
方法先将双缩脲试剂A加入组织样液,摇荡均匀,在加入双缩脲试剂B,摇荡均匀。如果组织里含有蛋白质,那么会看到溶液变成紫色。
注意事项现配现用
解释双缩脲试剂是由双缩脲试剂A和双缩脲试剂B两种试剂组成
双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为01g/mL的水溶液;
双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为001g/mL的水溶液。
双缩脲试剂可以验证蛋白质的存在。
注意事项在使用双缩脲试剂时候,必须注意,必须是先加01 g/mL氢氧化钠溶液,再加001 g/mL硫酸铜的水溶液。[2](若先加入硫酸铜[CuSO4]溶液,再加入氢氧化钠[NaOH]溶液,则无法充分制造碱性环境,此时CuSO4会与NaOH发生复分解反应,生成蓝色氢氧化铜[Cu(OH)2]沉淀,导致现象不清,无法较好地达到实验目的
与双缩脲区别双缩脲(NH2CONHCONH2)是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。
双缩脲试剂是由双缩脲试剂A和双缩脲试剂B两种试剂组成。
双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为01g/mL的水溶液;
双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为001g/mL的水溶液。
双缩脲试剂可以验证蛋白质的存在,遇蛋白质产生紫色。